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革蘭氏染液
    發(fā)布時間: 2019-08-12 14:00    
革蘭氏染液

革蘭氏染色試劑盒

名    稱 規(guī)格10ml 規(guī)格100ml 規(guī)格250ml 規(guī)格500ml
結晶紫 10ml
 100ml
 250ml
 500ml
碘    液 10ml
 100ml
 250ml
 500ml
95%酒精 10ml
 100ml
 250ml
 500ml
蕃      紅 10ml
 100ml
 250ml
 500ml

   革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌細胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，乙醇脫色時，肽聚糖脫水使孔徑縮小，故保留結晶紫-碘復合物在細胞膜上，呈紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，脫色后類脂外膜迅速溶解，縫隙加大，結晶紫與碘復合物溶出，因此乙醇脫色后再經(jīng)番紅復染，呈紅色。

革蘭氏染色法

一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是:

1、 取載玻片用紗布擦干，載玻片的一面用marker筆畫一個小圈(用來大致確定菌液滴的位置)。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2、 涂片:

液體培養(yǎng)基:左手持菌液試管，在酒精燈火焰附近5cm左右打開管蓋;右手持接種環(huán)在火焰中燒灼滅菌，等冷卻后從試管中沾取菌液一環(huán)，在潔凈無脂的載玻片上涂直徑2mm左右的涂膜，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

固體培養(yǎng)基:先在載玻片上滴一滴無菌水，再用接種環(huán)取少量菌體，涂在載玻片上，使其薄而均勻。

3、 晾干:讓涂片在空氣中自然干燥。

4、 固定:讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定(以不燙手為宜)。

5、 染色:將固定過的涂片放報紙上，滴加草酸銨結晶紫液，染1min。

6、 水洗:用水緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。簡單染色結束可觀察細胞形態(tài)。

7、 媒染:滴加1滴碘液，染1min，水洗。

8、 脫色:吸去殘留水，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色，立即水洗。

9、 復染:滴加蕃紅復染3-5min，水洗。至此，革蘭氏染色結束。